1、盐析法:多用于各种蛋白质和酶的分离纯化,不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。
2、等电点沉淀法:不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。
3、有机溶剂沉淀法:多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化,中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。
沉淀蛋白质的方法五种
蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂与某些酸(如三氯醋酸)沉淀等。
盐析法
在蛋白质溶液中加入大量的硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐,破坏蛋白质的水化膜和中和电荷,使蛋白质颗粒相互聚集,发生沉淀。
等电点沉淀等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。
有机溶剂沉淀有机溶剂能降低溶液的电解常数,从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力,导致溶解度的降低;另外,有机溶剂与水的作用,能破坏蛋白质的水化膜,故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法称有机溶剂分段沉淀法。常用于蛋白质或酶的提纯。使用的有机溶剂多为乙醇和丙酮。
重金属盐沉淀法其原理是重金属盐可与蛋白质形成不溶于水的蛋白盐沉淀,从达到沉淀蛋白质的目的。
生物碱试剂/酸沉淀蛋白质又可与生物碱试剂以及某些酸结合成不溶性的盐沉淀,沉淀的条件应当是pH小于等电点,这样蛋白质带正电荷易于与酸根负离子结合成盐。
蛋白质沉淀有哪几种方法?哪些是可逆的沉淀反应
蛋白质沉淀 蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的.如果条件发生改变,破坏了蛋白质溶液的稳定性,蛋白质分子则聚集成大的颗粒沉淀出来.
蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关,只要破坏这些条件,蛋白质自然会从溶液中沉淀出.
沉淀蛋白质有以下方法:
1、盐析法
2、有机溶剂沉淀法
3、重金属盐沉淀法
4、生物碱试剂和某些酸(三氯醋酸,磺基水杨酸,硝酸等)沉淀法
5、加热变性沉淀法
蛋白质变性:蛋白质的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象.蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时,次级键受到破坏,导致天然构象的破坏,使蛋白质的生物活性丧失.
蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀.
蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层和电荷.若无外加条件,不致互相凝集.然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出.
可以看出,如将蛋白质溶液pH调节到等电点,蛋白质分子呈等电状态,虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了.但是还有水化膜起保护作用,一般不致于发生凝聚作用,如果这时再加入某种脱水剂,除去蛋白质分子的水化膜,则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀;反之,若先使蛋白质脱水,然后再调节pH到等电点,也同样可使蛋白质沉淀析出.
有哪些沉淀方法可以纯化蛋白质?多写几种
1、等电点沉淀法.蛋白在其等电点位置溶解度最低,因而易于沉淀出来.
2、盐析法.根据蛋白在不同浓度的盐溶液中溶解度不同,进行蛋白分离纯化.
3、有机溶剂沉淀法.如乙醇、丙酮能使大多数球状蛋白在水溶液中的溶解度降低,使得蛋白从溶液中沉淀出来.
蛋白质加什么沉淀?
1.蛋白质的盐析反应,加饱和硫酸铵,生成沉淀,静置,然后倒出少量混浊沉淀,加水,沉淀溶解。原因:硫酸铵使蛋白质发生盐析,是可逆沉淀,加水后可以溶解。2.重金属沉淀,加硝酸银,生成沉淀,静置,去上清液,向沉淀加水,沉淀不溶解。原因:重金属离子使蛋白质变性,是不可逆沉淀,所以加水后无法溶解。3.加有机酸,加三氯乙酸,生成沉淀,倾去上清液,向沉淀加水,沉淀不溶解。原因:三氯乙酸可提供羟基或者羰基的氢或氧,酸根与带正电荷的蛋白质结合成不溶性物质,是不可逆沉淀。加水后沉淀不溶解。4.向蛋白加百分之九十五的乙醇,乙醇使蛋白质变性,产生沉淀。
(1)可逆沉淀:在温和条件下,通过改变溶液的pH或盐浓度等,使蛋白质从胶体溶液中沉淀出来。在沉淀过程中,蛋白质的结构和性质都没有发生显著变化,在适当的条件下,蛋白质可以重新溶解形成溶液,所以这种沉淀又称为非变性沉淀。可逆沉淀是分离纯化蛋白质的基本方法,如等电点沉淀法、盐析法(saltingout)等,在低温下使用有机溶剂(如乙醇或丙酮)短时间作用于蛋白质也可以使蛋白质发生可逆沉淀。
中性盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液使蛋白质沉淀析出的作用称为盐析,其原理是高浓度的盐能破坏水化层并中和电荷,从而使蛋白质聚集。使不同蛋白质析出的盐浓度不同,如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出,而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀能够再溶解于低盐溶液,称为盐溶故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
(2)不可逆沉淀:在强烈沉淀条件下,蛋白质胶体溶液的稳定性被破坏,使蛋白质沉淀出来。由于这种强烈的沉淀条件同时破坏了蛋白质的结构,产生的蛋白质沉淀不能再重新溶解于水,所以又称为变性沉淀。如加热沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀和生物碱沉定等都属于不可:沉淀。
蛋白质的变性指蛋白质在理(高温、高压)、化化学(酸碱、变性剂)作用下,高级结构遭破坏,其心理化性质和生物功能同时发生改变的过程与现象。变性的蛋白质容易相互聚集形成沉流保是有些情况下,当维持溶液稳定的条件仍然存在时(如电荷),蛋白质并不沉淀。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。